Le village plonge ses racines dans l’époque étrusque et tire probablement son nom d'un temple dédié à la déesse Isis. Montisi est ensuite devenu un avant-poste romain et, depuis le XIIe siècle, il appartient à la famille Cacciaconti.
L'une des histoires les plus connues de ce territoire concerne, encore aujourd’hui, Simone Cacciaconti qui, au XIIe siècle, après avoir partagé les terres avec ses deux frères, tenta d’imposer son contrôle sur le village surtout après quelques signes d'indépendance de la part de ses habitants : une bataille sanglante s'ensuivit et, bien que victorieux, Simone pilla les terres, tuant la plupart des habitants.
À sa mort, Cacciaconti donna les terres de Montisi à l'Ospedale Santa Maria della Scala de Sienne qui, au XVIe siècle, y construisit une grange fortifiée pour stocker, garder et défendre les produits provenant des vastes territoires dans le Val d'Orcia, les Crete Senesi et la Maremme.
La grange de Montisi est une structure fortifiée ayant un aspect imposant, qui a subi de nombreuses modifications et rénovations au cours des époques successives. Le complexe comprenait également une tour, réplique à l'échelle de la tour Mangia de Sienne, détruite par les troupes allemandes en 1944.
Aujourd'hui, la grange abrite l'un des plus petits théâtres au monde.
Le principal lieu de culte du village est l'église paroissiale de Santissima Annunziata, datant du XIIIe siècle et changée à plusieurs reprises au cours des siècles. À l'intérieur, vous trouverez le retable de la Vierge à l'Enfant entre les saints Paul, Jacques, Pierre et Louis Roi de Neroccio réalisé par Bartolomeo de Landi, datant de 1456.
Les autres églises du village sont l'oratoire de Sant'Antonio Abate - qui abrite une exposition d'objets sacrés - et le sanctuaire de la Madonna delle Nevi, patronne de Montisi, le long de la route menant à San Giovanni d'Asso.
