Die Pinacoteca Nazionale di Siena, die sich im Palazzo Buonsignori und im angrenzenden Palazzo Brigidi befindet, ist die weltweit bedeutendste Sammlung von Werken der Scuola senese (Schule von Siena) mit einem Schwerpunkt auf dem 14. und 15. Jahrhundert, umfasst aber auch Meisterwerke des Manierismus und des Barock.
Von Duccio di Buoninsegna über Simone Martini bis hin zu Sano di Pietro und il Vecchietta ist die zweite Etage des Museums ein chronologisch aufgebauter Rundgang vom 13. bis zum 15. Jahrhundert. Unter den hier ausgestellten Werken befinden sich das Polyptychon Nr. 28 und die wertvolle „Madonna der Franziskaner“ von Buoninsegna sowie die „Verkündigung“ von Ambrogio Lorenzetti (das letzte bekannte Werk des Sieneser Malers). Erwähnenswert ist auch die berühmte „Mystische Hochzeit der Heiligen Katharina“, ein Tafelbild von Michelino da Besozzo, das auch das einzige signierte Werk des Künstlers ist.
Auch das 16. und 17. Jahrhundert sind für Siena wegen der Qualität der künstlerischen Produktion kennzeichnend, die in der Pinakothek im unteren Stockwerk angemessen repräsentiert ist. Die wichtigsten Vertreter dieser Zeit waren Sodoma und Domenico Beccafumi. Von Letzterem ist das große Gemälde der Heiligen Katharina von Siena, die zwischen den Heiligen Benedikt und Hieronymus die Stigmata empfängt, besonders bemerkenswert.
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